Հակա-բիոֆիլմի ազդեցություն եւ արծաթե նիտրատային սալիկների բուժման խթանում

Շնորհակալություն Nature.com այցելելու համար: Դուք օգտագործում եք զննարկչի տարբերակը, ունի սահմանափակ CSS աջակցություն: Լավագույն արդյունքների համար խորհուրդ ենք տալիս օգտագործել ձեր զննարկչի (կամ հաշմանդամություն ունեցող համատեղելիության ռեժիմը Internet Explorer- ում) օգտագործել: Միեւնույն ժամանակ, շարունակական աջակցություն ապահովելու համար մենք տեղում ենք տեղադրում առանց ստերի կամ JavaScript- ի:
Վերքերի մանրէական աճը հաճախ դրսեւորվում է որպես բիոֆիլներ, որոնք խանգարում են բուժմանը եւ դժվար է արմատախիլ անել: Նոր արծաթե զգեստները պնդում են վերքի վարակների դեմ պայքարելու համար, բայց նրանց հակամրոֆիլմի արդյունավետությունն ու վարակված-անկախ բուժիչ ազդեցությունները հիմնականում անհայտ են: Օգտագործելով staphylococcus aureus- ի եւ pseudomonas aeruginosa- ի VITRO- ի եւ VIVO Biofilm մոդելներում, մենք հայտնում ենք AG1 + իոն արտադրող հանդերձանքների արդյունավետության մասին. AG1 + ETHYLENDIENETETRAACETIT թթու պարունակող եւ բենզետոնիումի քլորիդ պարունակող սալիկ (AG1 + / EDTA / BC) եւ արծաթե նիտրատ պարունակող սալիկապատկերներ (AG Ծանրոցներ): , որոնք արտադրում են Ագ 1 +, AG2 + եւ Ag3 + իոններ, վերքերի բիոֆիլմի դեմ պայքարելու եւ դրա ազդեցության վրա ապաքինման վրա: Զգեստները նվազագույն էֆեկտներ ունեին վերքի բիոֆիլմի մեջ vitro- ի եւ մկների մեջ (C57BL / 6J): Ի հակադրություն, թթվածնային AG աղեր եւ AG1 + / EDTA / BC Զարդեր զգալիորեն կրճատեցին կենսունակ բակտերիաների քանակը Vitro- ի կենսունակ բակտերիաների եւ ցուցադրեցին մանրէային եւ EPS բաղադրիչների զգալի կրճատում մուկի վերքի բիոֆիլում: Այս հանդերձանքները տարբեր ազդեցություն ունեին բիոֆիլմի վարակված եւ ոչ բիոծելի վարակված վերքերի բուժման վրա, թթվածնային աղի զգեստներով, որոնք ավելի մեծ օգտակար ազդեցություն են թողնում վերացման բուժման եւ այլ արծաթերի հետ համեմատած վերացման բուժման եւ այլ արծաթերի հետ: Արծաթե սալիկապատված տարբեր ֆիզիկաքիմիական հատկությունները կարող են տարբեր ազդեցություն ունենալ վերքի բիոֆիլմի եւ բուժման վրա, եւ դա պետք է հաշվի առնել, երբ ընտրում է սոուսը `բիոֆիլմի վարակված վերքերի բուժման համար:
Քրոնիկ վերքերը սահմանվում են որպես «վերքեր, որոնք չեն կարողանում կարգին եւ ժամանակին բուժման նորմալ փուլերով առաջընթաց ունենալ»: 1: Քրոնիկ վերքերը ստեղծում են հոգեբանական, սոցիալական եւ տնտեսական ծանրաբեռնվածություն հիվանդների եւ առողջապահական համակարգի համար: Վերքերը բուժելու եւ հարակից կոմբերգությունները բուժելու համար տարեկան NHS ծախսերը 2017-182 թվականներին գնահատվում են 8,3 միլիարդ ֆունտ: Քրոնիկ վերքերը ներկայումս ներկայումս հրատապ խնդիր են ԱՄՆ-ում, Medicare- ին գնահատելով վերքերով հիվանդների բուժման տարեկան արժեքը 28.1-9 միլիարդ դոլարով:
Վարակումը մեծ գործոն է, որը կանխում է վերքերի բուժումը: Վարակները հաճախ դրսեւորվում են որպես կենսաֆիլմներ, որոնք առկա են ոչ բուժիչ քրոնիկ վերքերի 78% -ում: Biofilms- ի ձեւը, երբ միկրոօրգանիզմները դառնում են անդառնալիորեն կցված մակերեսներին, ինչպիսիք են վերքերի մակերեսները եւ կարող են համախմբվել արտաբջջային պոլիմեր (EPS): Վերքի Biofilm- ը կապված է հյուսվածքների վնասի հանգեցնող բորբոքային մեծ արձանի հետ, որը կարող է հետաձգել կամ կանխել բուժումը 4: Հյուսվածքների վնասման բարձրացումը կարող է մասնակիորեն պայմանավորված լինել Matrix Metalloproteinases, Collagenase, Elastase եւ Reactive թթվածնի տեսակների ակտիվության բարձրացմանը: Ավելին, բորբոքային բջիջներն ու բիոֆիլներն իրենք են թթվածնի բարձր սպառողներ եւ, հետեւաբար, կարող են առաջացնել տեղական հյուսվածքային հիպոքսիա, անհրաժեշտ է արդյունավետ թթվածնի, անհրաժեշտ հյուսվածքների վերականգնման համար անհրաժեշտ կենսական թթվածնի բջիջներ 6:
Հասուն բիոֆիլմները խիստ դիմացկուն են հակամանրէային գործակալների նկատմամբ, որոնք պահանջում են ագրեսիվ ռազմավարություններ վերահսկել կենսաֆաբրական վարակները, ինչպիսիք են մեխանիկական բուժումը, որին հաջորդում է արդյունավետ հակամանրէային բուժում: Քանի որ Biofilms- ը կարող է արագորեն վերականգնել, արդյունավետ հակամանրէայինները կարող են նվազեցնել վիրաբուժական դեբրիդեմենտից հետո վերափոխման ռիսկը:
Արծաթը ավելի ու ավելի է օգտագործվում հակամանրէային սալիկների մեջ եւ հաճախ օգտագործվում է որպես առաջին գծի բուժում քրոնիկ վարակված վերքերի համար: Կան բազմաթիվ առեւտրային ապրանքատեսակներ, որոնք ունեն ավելի շատ արծաթե սալիկներ, որոնցից յուրաքանչյուրը պարունակում է այլ արծաթե կազմ, համակենտրոնացում եւ բազային մատրիցա: Արծաթե բազկաթոռների առաջընթացը հանգեցրել է արծաթե նոր բազկաթոռների զարգացմանը: Արծաթե (AG0) մետաղական ձեւը իներտ է. Հակամիական արդյունավետության հասնելու համար այն պետք է կորցնի էլեկտրոնը `իոնային արծաթ ձեւավորելու համար (AG1 +): Ավանդական արծաթե զարդերը պարունակում են արծաթե միացություններ կամ մետաղական արծաթ, որոնք, երբ հեղուկը ենթարկվում են հեղուկի, քայքայվում են, որ ձեւավորեք AG1 + իոններ: Այս AG1 + իոնները արձագանքում են բակտերիալ բջիջին, էլեկտրոնները հեռացնում են կառուցվածքային բաղադրիչներից կամ գոյատեւման համար անհրաժեշտ կրիտիկական գործընթացներից: Արտոնագրված տեխնոլոգիան հանգեցրել է նոր արծաթե միացության, AG ակնկալիքի (արծաթե նիտրատ, AG7NO11) զարգացմանը, որն ընդգրկված է վերքերի սալիկների մեջ: Ի տարբերություն ավանդական արծաթի, թթվածնի պարունակող աղերի տարրալուծումը արծաթի վիճակ է արտադրում ավելի բարձր Վալենտով (Ագ 1 +, Ag2 + եւ Ag3 +): In vitro ուսումնասիրություններում ցույց են տվել, որ թթվածնային արծաթե աղի ցածր կոնցենտրացիաները ավելի արդյունավետ են, քան մեկ իոնային արծաթ (AG1 +) պաթոգեն բակտերիաների դեմ, ինչպիսիք են կեղծ ածխաջրերը, staphylococcus aureus եւ escherichia coli8,9: Արծաթե սոուսների մեկ այլ նոր տեսակը ներառում է լրացուցիչ բաղադրիչներ, մասնավորապես `էթիլենիմինետրիաթթուաթթու (EDTA) եւ Benzethonium քլորիդ (մ.թ.ա.), որոնք հաղորդվում են, որ թիրախավորվում են Biofilm- ի ներթափանցումը: Այս նոր արծաթե տեխնոլոգիաները նոր ուղիներ են տալիս վերքերի բիոՖիլմաներին թիրախավորելու համար: Այնուամենայնիվ, վերքերի միջավայրի եւ վարակիչ-անկախ ապաքինման վրա այս հակամանրէների ազդեցությունը կարեւոր է ապահովելու համար, որ նրանք չեն ստեղծում վերքերի անբարենպաստ միջավայր կամ հետաձգում ապաքինումը: Vitro Silver Cytotoxicity- ի վերաբերյալ մտահոգությունները հաղորդվել են մի քանի արծաթե սալիկների հետ 10,11: Այնուամենայնիվ, In vitro Cytotoxicity- ը դեռ չի թարգմանվել Vivo Toxicity- ում, իսկ մի քանի AG1 + Dressings ցուցադրել է լավ անվտանգության պրոֆիլը 12:
Այստեղ մենք ուսումնասիրեցինք կարբոքսիմեթլիկլուցլյուլկլյուլկուլյոզայի միջոցների արդյունավետությունը, որը պարունակում է նոր արծաթե ձեւակերպումներ վերքերի բիոֆիլմի եւ VIVO- ի վերքերի բիոֆիլմի դեմ: Բացի այդ, գնահատվել են այս հագուստի հետեւանքները իմունային պատասխանների եւ վարակի բուժման վերաբերյալ:
Օգտագործված բոլոր սալերը առեւտրի առումով մատչելի էին: 3M Kerracel GEL մանրաթելային սոուս (3M, Knutsford, Միացյալ Թագավորություն) ոչ հակամանրէային 100% Carboxymethylcellululos (CMC) գել մանրաթելային սոուս, որն օգտագործվում էր որպես այս ուսումնասիրության վերահսկման հագնվելու: Գնահատվել են երեք հակամանրէային CMC արծաթե զարդեր, մասնավորապես 3M Kerracel AG սոուս (3M, Knutsford, UK), որը պարունակում է 1,7 վրկ: Թթվածնային արծաթե աղ (AG7NO11) Բարձրագույն Վալանսի արծաթե իոններում (AG1 +, Ag2 + եւ Ag3 +): Ag7no11- ի որոշման ժամանակ 1: 2: 4-ի հարաբերակցությամբ ձեւավորվում են AG11, Ag2 + եւ Ag3 + իոնները: Aquacel AG Լրացուցիչ սոուս, որը պարունակում է 1,2% արծաթե քլորիդ (COM1 +) (COM1ES, DEESIDE, UK)
Այս ուսումնասիրության մեջ օգտագործված շտամներն էին Pseudomonas Aeruginosa NCTC 10781 (հանրային առողջությունը Անգլիան, Salisbury) եւ Staphylococcus Aureus NCTC 6571 (հանրային առողջություն Անգլիա):
Բակտերիաները գիշերում աճել են Մյուլլեր-Հինթոն Արգանակում (օքսիդ, Ալտրինչամ, Մեծ Բրիտանիա): Գիշերային մշակույթն այնուհետեւ նոսրացվեց 1: 100-ում, Mueller-Hinton արգանակում եւ 200 մկլով ծածկված ստերիլ 0.2 մկմ Whatman- ի վրա (Whatman Plc, Maidstone, UK) Mueller-Hinton Agar Plates (Sigma-Aldrich Company Ltd, Kent, Մեծ Բրիտանիա) ) ) Colonial Biofilm- ի ձեւավորումը 37 ° C- ով 24 ժամվա ընթացքում: Այս գաղութային բիոֆիլմները փորձարկվել են լոգարիթմական նեղացման համար:
Հագուստը կտրեք 3 սմ 2 քառակուսի կտորների եւ նախապես խոնավացրեք ստերիլ դեոնիզացված ջրով: Տեղադրեք վիրակապը գաղութի բիոֆիլմի վրա, ագարի ափսեի վրա: Յուրաքանչյուր 24 հա բիոֆիլմը հանվել է, եւ կենսունակ մանրէները կենսունակ (CFU / ML) քանակի հավաքվել են սերիական նոսրացումով (10-1-10-7) ցերեկային անկյունային չեզոքացման արգանակում (Merck-Millipore): 24 ժամ ինկուբացիայից հետո 37 ° C- ում ստանդարտ ափսեի հաշվարկներն իրականացվել են Mueller-Hinton agar ափսեների վրա: Յուրաքանչյուր բուժում եւ ժամանակաշրջան կատարվեց եռակի, իսկ ափսեի հաշվարկները կրկնվեցին յուրաքանչյուր նոսրացման համար:
Խոզի որովայնի մաշկը ձեռք է բերվում կանանց մեծ սպիտակ խոզերից 15 րոպեի ընթացքում `Եվրամիության արտահանման չափանիշներին համապատասխան: Մաշկը սափրվել եւ մաքրվել է ալկոհոլային անձեռոցիկներով, ապա 24 ժամ սառեցված է -80 ° C- ով `մաշկը շեղելու համար: Հալելուց հետո 1 սմ 2 մաշկի կտորները երեք անգամ լվացվեցին pbs, 0,6% նատրիումի հիպոքլորիտով, իսկ 70% էթանոլը ամեն անգամ 20 րոպե: Էպիդերմիսը հանելուց առաջ հեռացրեք մնացած էթանոլը `3 անգամ լվանալ ստերիլ pbs- ում: Մաշկը մշակվել է 6-լավ ափսեի մեջ `0,45 մմ հաստությամբ նեյլոնե թաղանթով (Merck-Millipore) վերեւում եւ 3 ներծծող բարձիկներ (Merck-Millipore) 3 մլ պտղի Bovine շիճուկ (SIGMA) լրացված 10% Dulbecco's փոփոխված Արծիվ Միջին (Dulbecco- ի փոփոխված Eagle Medible - Aldrich Ltd.):
Գաղութային բիոֆիլմներն աճել են, ինչպես նկարագրված է Biofilm ազդեցության ուսումնասիրությունների համար: 72 ժամ մեմբրանի վրա բիոֆիլմը մշակելուց հետո Biofilm- ը կիրառվեց մաշկի մակերեսին `օգտագործելով ստերիլ պատվաստման հանգույցը, իսկ թաղանթը հանվել է: Biofilm- ը այնուհետեւ ինկուբացվել է խոզի դերմինների վրա `37 ° C լրացուցիչ 24 ժամվա ընթացքում, որպեսզի biofilm- ը հասունանա եւ հավատարիմ մնա խոզի մաշկը: Biofilm- ը հասունացել է եւ կցվել է, 1,5 սմ 2 հագնվելու, նախապես խոնավեցված ստերիլ թորած ջրով, ուղղակիորեն կիրառվել է մաշկի մակերեսին եւ 24 ժամվա ընթացքում ինկուբացվել է 37 ° C: Կենսունակ բակտերիաները պատկերել են, օգտագործելով միատեսակ կիրառելով Prestoblue բջջային կենսունակության ռեակտիվ (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) յուրաքանչյուր փորձի apical մակերեւույթին եւ 5 րոպե ինկուբացիոն: Օգտագործեք Leica DFC425 թվային ֆոտոխցիկը `Leica Mz8 մանրադիտակի պատկերներ տեղադրելու համար: Տարածքներ Գունավոր վարդագույնը քանակականացվել է, օգտագործելով Image Pro ծրագրային տարբերակը 10 (Media CyberNetics Inc, Rockville, MD Image-Pro (Mediacy.com)): Էլեկտրոնային մանրադիտակների սկանավորումը կատարվել է ինչպես նկարագրված է ստորեւ:
Գիշերներում աճեցված մանրէները նոսրացան 1: 100-ը Մյուլեր-Հինթոն արգանակում: 200 մկուլ մշակույթ ավելացվեց ստերիլ 0.2 մկմ Whatman Cyclopore Membrane- ին (Whatman, Maidstone, UK) եւ plated վրա Mueller-Hinton agar. Biofilm ափսեներ ինկուբացվել է 37 ° C ջերմաստիճանում, 72 ժամվա ընթացքում `հասուն բիոֆիլմի ձեւավորումը թույլ տալու համար:
Biofilm- ի հասունացումից 3 օր հետո 3 սմ քառակուսի վիրակապը ուղղակիորեն տեղադրվեց Biofilm- ի վրա եւ 24 ժամվա ընթացքում 37 ° C ջերմաստիճանում: Birofilm մակերեւույթից վիրակապը հանելուց հետո յուրաքանչյուր Biofilm- ի մակերեւույթին ավելացվել է 1 մլ prestoblue բջջային կենսունակություն (Invitrogen, Waltham, MA): Մակերեւույթները չորացել են նախքան Nikon D2300 թվային ֆոտոխցիկի օգտագործումը (Nikon UK Ltd., Միացյալ Թագավորություն):
Պատրաստեք գիշերային մշակույթներ Mueller-Hinton Agar- ի վրա, անհատական ​​գաղութներ փոխանցեք 10 մլ մյուելլեր-Հինթոն արգանակ եւ ինկուբացիա Shaker- ի վրա 37 ° C (100 RPM): Գիշերային ինկուբացիայից հետո մշակույթը նոսրացվեց 1: 100-ում Մյուլեր-Հինթոնյան արգանակում եւ 300 մկմ շրջանաձեւի վրա էր ընկել Mueller-Hinton agar- ի վրա եւ 37 ° C- ի վրա Մի շարք Մի շարք Հասուն բիոֆիլմը կիրառվեց վերքի վրա, ինչպես նկարագրված է ստորեւ:
Կենդանիների հետ բոլոր աշխատանքներն իրականացվել են «Մանչեսթեր» համալսարանում, Կենդանիների բարեկեցության եւ բարոյական ակնարկների (P8721BD27) կողմից հաստատված ծրագրի լիցենզիայի ներքո եւ 2012 թվականի վերանայված Ասպայի կողմից հրապարակված ուղեցույցների համաձայն: Բոլոր հեղինակները հավատարիմ են ժամանման ուղեցույցներին: Վիվո ուսումնասիրություններում բոլորի համար օգտագործվել է ութ շաբաթավերջի C57BL / 6J մկներ (Envigo, Oxon, UK): Մկները ցավազրկվել են Isoflurane- ի հետ (Piramal Critical Care Ltd, West Drayton, UK) եւ նրանց dorsal մակերեսները սափրվել եւ մաքրվել: Այնուհետեւ յուրաքանչյուր մկնիկ տրվել է 2 × 6 մմ-ի ժամանակաչափ վերք, օգտագործելով Stiefel Biopsy Punch (Schuco International, Hertfordshire, Միացյալ Թագավորություն): Բիոֆիլմի վարակված վերքերի համար կիրառեք 72 ժամանոց գաղութային բիոֆիլմը, որը մեծացել է մեմբրանում, ինչպես վերը նկարագրված է վերքի մաշկային շերտին `օգտագործելով ստերիլ պատվաստման հանգույցը, օգտագործելով ստերիլ պատվաստումը անմիջապես վնասվածքից հետո եւ վերացնել մեմբրանը: Խոնավության միջավայրը պահպանելու համար մաշկի վրա նախապես խոնավացված է ավելի ստերիլ ջրով: Զգեստները կիրառվում էին ուղղակիորեն յուրաքանչյուր վերքի եւ ծածկված 3M Tegaderm Film (3M, Bracknell, UK) եւ Mastisol հեղուկ սոսինձ (EloCestest HealthCare, Ferndale, MI), որոնք կիրառվում են ծայրերի շուրջ, լրացուցիչ կպչունություն ապահովելու համար: Բուպրենորֆին (Animalcare, York, UK) կառավարվում էր 0,1 մգ / կգ կոնցենտրացիայի, որպես անալգետիկ միջոց: Կուլել մկները վնասվածքից երեք օր անց `օգտագործելով 1-ին մեթոդը եւ հեռացրեք, կիսով չափ պահեք եւ անհրաժեշտության դեպքում պահեք վերքի տարածքը:
Hematoxylin (Thermofisher գիտական) եւ Eosin (Thermofisher գիտական) ներկառուցումը կատարվել է արտադրողի արձանագրության համաձայն: Վերքի տարածքը եւ ճառագայթայինացումը քանակականացվել են, օգտագործելով Image Pro ծրագրային տարբերակը 10 (Media CyberNetics Inc, Rockville, MD):
Հյուսվածքային հատվածները ցրված էին քսիլենում (Թերմոֆիշերների գիտական, Լոֆբորո, Մեծ Բրիտանիա), վերականգնելով 100-50% գնահատված էթանոլով եւ համառոտ ընկղմված ջրով (թերմոֆիշեր գիտական): Արտադրողի արձանագրության համաձայն, իմունոհիստոչիմիստը իրականացվել է Vectastain Elite ABC PK-6104 KIT- ի միջոցով: Առաջնային հակամարմիններ NIMETOPHIS NIMP-R14 (THEMOFISHER գիտական) եւ MACROPAGES MS CD107B PURE M3 / 84 (BD BIOSCIENS, WOKINGHAM, Մեծ Բրիտանիա) ABC եւ վեկտոր Nova Red Peroxidase (HRP) ենթաշերտ հավաքածու (վեկտորային լաբորատորիաներ, բուրգլերամ, CA) եւ վաճառվում է հեմատոքսիլինի հետ: Պատկերները ձեռք են բերվել Օլիմպուսի BX43 մանրադիտակի եւ Olympus DP73 թվային ֆոտոխցիկի (Olympus, Southend-on-Sea, UK):
Մաշկի նմուշները ֆիքսվել են 2,5% գլուտարալդեհիդ եւ 4% ֆորմալդեհիդե 0,1 մ հեպում (PH 7.4) 24 ժամվա ընթացքում 4 ° C ջերմաստիճանում: Նմուշները ջրազրկված էին, օգտագործելով գնահատված էթանոլը եւ չորացրած CO2- ով `օգտագործելով քվորում K850 կրիտիկական կետի չորանոց (քվորում տեխնոլոգիաներ Ltd, Loughton, UK) եւ փչել ոսկու-պալադիումի խառնուրդով: Նմուշները պատկերված էին, օգտագործելով Fei Quanta 250 սկան էլեկտրոնային մանրադիտակի (ջերմաֆիշերի գիտական) `վերքի կենտրոնական կետը պատկերացնելու համար:
Toto-1 Iodide (2 մկմ) կիրառվել է մկնիկի վերքերի վերքերի մակերեսի վրա եւ 37 ° C (Thermofisher Sciency) 37 ° C (10 մկմ) բուժվում է 37 ° C ջերմաստիճանում: 15-րոպեանոց Z-stack պատկերներ ստեղծվել են Leica TCS SP8 օգտագործելով:
Կենսաբանական եւ տեխնիկական վերարտադրող տվյալները աղյուսակ են եւ վերլուծվել, օգտագործելով GraphPad Prism V9 ծրագրակազմը (GraphPad ծրագիրը, La Jolla, CA): Dunnett- ի ​​հետմահու թեստի միջոցով բազմակի համեմատություններով տարբերության միակողմանի վերլուծություն օգտագործվել է յուրաքանչյուր բուժման եւ ոչ հակամանրէային կառավարման սոուսով տարբերությունների համար: A P արժեքը <0.05 համարվում էր նշանակալի:
Արծաթե գել մանրաթելային սալիկների արդյունավետությունը նախ գնահատվել է ստաֆիլոկոկուս Aureus եւ Pseudomonas Aeruginosa In vitro- ի բիոֆիլ գաղութների դեմ: Արծաթե զարդարանքը պարունակում է արծաթի տարբեր բանաձեւեր. Ավանդական արծաթե հագուստներ արտադրում են AG1 + իոններ; Edta / BC- ի հավելումից հետո արծաթե զարդեր, որոնք կարող են արտադրել AG1 + իոններ, կարող են ոչնչացնել Biofilm Matrix- ը եւ արծաթի հակաբակտերիալ ազդեցության տակ գտնվող մանրէներ բացահայտել: Ions15 եւ փորվածքներ, որոնք պարունակում են թթվածնային AG աղեր, որոնք արտադրում են Ագ 1 +, Ագ 2 + եւ Ագ 3 + իոններ: Դրա արդյունավետությունը համեմատվել է գոլային մանրաթելերից պատրաստված ոչ հակամանրէային կառավարման սոուսի հետ: Biofilm- ի սահմաններում կենսունակ բակտերիաները գնահատվել են յուրաքանչյուր 24 ժամվա ընթացքում 8 օրվա ընթացքում (Նկար 1): 5-րդ օրը Biofilm- ը թարմացվեց 3,85 × 105-ով: Staphylococc aureus կամ 1.22 × 105p: aeruginosa գնահատելու կենսաֆաբրական վերականգնումը: Համեմատապես ոչ հակամանրէային կառավարման սալիկների հետ, AG1 + Զգեստները նվազագույն ազդեցություն ունեցան ստաֆիլոկոկուս Աուրում եւ 5 օրվա ընթացքում `5 օրվա ընթացքում մանրէային կենսունակության վրա: Ի հակադրություն, 5 օրվա ընթացքում բուֆիլմի մեջ բակտերիաների սպանության մեջ արդյունավետ էին թթվածնային AG եւ BC աղիքներ պարունակող սալիկները: 5-րդ օրը պլանկտոնային մանրէների հետ կրկնելուց հետո կրկնելուց հետո կենսաֆիլմի վերականգնում չի նկատվել (Նկար 1):
Ստեֆիլոկոկուսային աղյուսակի եւ կեղծ բակտերիաների քանակական քանակություն `արծաթե սալիկներով բուժումից հետո բուժումից հետո: Ստաֆիլոկոկի աղիքների եւ կեղծիքային աերուգինոզայի բիոֆիլ գաղութները բուժվում էին արծաթե սալիկներով կամ ոչ հակամանրէային հսկող սարքերի հետ, եւ մնացած կենսունակ մանրէների թիվը որոշվում էր յուրաքանչյուր 24 ժամվա ընթացքում: 5 օր հետո Biofilm- ը վերազինվել է 3,85 × 105-ով: Staphylococc aureus կամ 1.22 × 105p: Bacteroplankton Pseudomonas Aeruginosa- ի գաղութները ձեւավորվել են անհատապես `կենսապահովման վերականգնումը գնահատելու համար: Գրաֆիկները ցույց են տալիս միջին +/- ստանդարտ սխալ:
Կենսազերծման կենսունակության վրա արծաթե հանդերձանքի ազդեցությունը պատկերացնելու համար կիրառվել են հագուստի մաշկի վրա աճեցված հասուն բիոֆիլմների վրա: 24 ժամ հետո հագնվելու է հագնվելու, եւ բիոֆիլմը ներկված է կապույտ ռեակտիվ ներկով, որը նյութափոխանակված է կենդանի մանրէներով `վարդագույն գույնով: Կոնտաժային հագուստով բուժվող բիոֆիլմները վարդագույն էին, նշելով կենսունակ բակտերիաների առկայությունը Biofilm- ի մեջ (Նկար 2 ա): Ի հակադրություն, AG Oxysols- ի հագնվելու հետ կապված բիոֆիլմը հիմնականում կապույտ էր, նշելով, որ խոզի մաշկի մակերեւույթի մնացած մանրէները (Նկար 2 բ): Խառը կապույտ եւ վարդագույն գունավորումը նկատվել է AG1- ով վերաբերող բիոֆիլմներում `- նշում է բիոֆիլմի մեջ կենսունակ եւ ոչ կենսունակ մանրէների առկայությունը, իսկ EDTA- ի 2C- ի համար նախատեսված սույն բառերը, հիմնականում կապույտ բծերով: նշելով արծաթե սոուսից չհաղած տարածքները (Նկար 2D): Ակտիվ (վարդագույն) եւ ոչ ակտիվ (կապույտ) տարածքների քանակականացումը ցույց տվեց, որ կառավարման կարկատիչը 75% ակտիվ է (Նկար 2): AG1 + + EDTA / BC- ի հանդերձանքը նմանապես կատարվում է թթվածինացված AG աղի սալիկների հետ, համապատասխանաբար 13% եւ 14% -ի գոյատեւման տեմպերով: AG1 + Equenge- ը նաեւ 21% -ով կրճատեց մանրէների կենսունակությունը: Այս բիոՖիլֆսան դիտվել են, օգտագործելով սկան էլեկտրոնային մանրադիտակի (SEM) սկանավորման միջոցով: Վերահսկիչ հագնվելու եւ AG1 + հագնվելու միջոցով նկատվել է pseudomonas aeruginosa- ի մի շերտ, որը ծածկում է խոզապուխտ մաշկը (Նկար 2F, H), մինչդեռ AG1 + հագնվելու բուժումից հետո հայտնաբերվել են մի քանի մանրէային բջիջներ: Կոլագեն մանրաթելերը կարող են համարվել խոզապուխտի մաշկի հյուսվածքի կառուցվածքը (Նկար 2G): Ag1 + + + EDTA / BC- ի հետ բուժումից հետո տեսանելի էին բակտերիալ սալիկների եւ հիմքում ընկած կոլագենի մանրաթելային ափսեներ (Նկար 2i):
Արծաթե հագնվելու բուժումից հետո կեղծ բարերոզային բիոֆիլմի արտացոլում: (A-D) pseudomonas aeruginosa կենսունակության վրա բակտերիալ բիոֆիլմներում աճեցված է մորթուց մաշկի վրա աճեցված բենզալացվածը `օգտագործելով PrestoBlue Viame Dy 1-ը` արծաթե հանդերձանքով կամ ոչ հակամանրէային հսկողությամբ: Կենդանի մանրէները վարդագույն են, ոչ կենսունակ մանրէներ եւ խոզի մաշկը կապույտ են: Ե) մորթուց մաշկի վրա (վարդագույն տեղում) pseudomonas aeruginosa biofilms- ի քանակը `օգտագործելով սկան էլեկտրոնային մանրադիտակային պատկերների 10 (FI) սկանավորում եւ 24 ժամվա ընթացքում բուժվում է արծաթե սոուսով կամ բուժվում: SEM մասշտաբի բար = 5 մկմ: (J-M) գաղութային բիոֆիլման աճեց զտիչների վրա եւ պատրաստված էր PrestoBlue Reactive Dye- ի հետ 24 ժամ արծաթե հագուստով:
Պարզելու համար, թե սերտ կապը սերտ կապ է սերտ կապի միջեւ, եւ բիոֆիլմները ազդել են հագուստի արդյունավետության վրա, հարթ մակերեւույթի վրա տեղադրված գաղութային բիոֆիլմները բուժվում էին 24 ժամվա ընթացքում, իսկ հետո վիտրաժներով ներկվում են ռեակտիվ ներկանյութերով: Չբուժված բիոֆիլմը մուգ վարդագույն գույն էր (Նկար 2J): Ի տարբերություն բունյամների, որոնք վերաբերվում են թթվածնային AG աղեր (Նկար 2K), որոնք պարունակում են թթվածնային AG աղեր (Նկար 2K), Biofilms- ը, որոնք վերաբերվում են AG1 + կամ AG1 + + + EDTA / BC պարունակող սալիկներով (Նկար 2 լ, մ): Այս վարդագույն գույնը ցույց է տալիս կենսունակ մանրէների առկայությունը եւ կապված է հագնվելու մեջ գտնվող կարի տարածքի հետ: Այս կարի ոլորտները ստեղծում են մեռած տարածքներ, որոնք բակտերիաները թույլ են տալիս գոյատեւել բիոֆիլմում:
Վիվո արծաթե հագուստի արդյունավետությունը գնահատելու համար, հասուն S. Aureus- ի եւ P. Aeruginosa Biofilms- ին վարակված մկների ամբողջական հաստությունը: 3 օրից հետո բուժումից հետո մակրոոսկոպիկ պատկերի վերլուծությունը ցույց տվեց վերքի փոքր չափսեր, երբ բուժվում է թթվածնային աղի սալիկներով, համեմատած ոչ հակամանրէային կառավարման հագուստի եւ այլ արծաթե սալիկների հետ (Նկար 3A-H): Այս դիտարկումները հաստատելու համար վերքերը հավաքվել են, իսկ վերքերի տարածքը եւ վերաբեռնումը քանակականացվել են հեմատոքսիլինի եւ Eosin- ի վիտրաժային հյուսվածքների հատվածներում, օգտագործելով Image Pro ծրագրային տարբերակը 10 (Նկար 3i-L):
Վերքերի մակերեսի վրա արծաթե սալիկների ազդեցությունը եւ բիոֆիլմներով վարակված վերքերի վերաթողավորումը: (A-H) Փոքր բջիջները, որոնք վարակված են կեղծ կոդով աերուգինոզա (A-D) եւ staphylococcus aureus (e-h) երեք օրվա բուժումից հետո, ոչ ավլված հսկիչ սոուսով, թթվածնային AG աղի սոուսով, AG1 + հագնվելու եւ AG1 + Հագուստը: Ներկայացուցչական մակրոոսկոպիկ պատկերներ: Մկների վերքեր Ag1 + + EDTA / BC հագնվելու հետ: (Il) Ներկայացուցչական կեղծ պատկերներ Aeruginosa վարակը, հեմատոքսիլինի եւ Eosin- ով վիտրաժներ, որոնք օգտագործվում են վերքերի տարածքը եւ էպիթելի վերականգնումը քանակականացնելու համար: Վերքի տարածքի (մ) եւ տոկոսային ճառագայթների քանակի (թիվ) եւ տոկոսային ճառագայթների քանակը (N, հ) վարակված վերքերի (մ) եւ staphylococcus aureus (o, p) biofilms (մեկ բուժման խմբի համար N = 12): Գրաֆիկները ցույց են տալիս միջին +/- ստանդարտ սխալ: * նշանակում է p = <0.05 ** նշանակում է p = <0.01; Մակրոոսկոպիկ մասշտաբ = 2.5 մմ, պատմաբանների սանդղակ = 500 մկմ:
Pseudomonas Aeruginosa Biofilm- ի (Նկար 3M) վերքերի վրա վերքերի տարածքի քանակականացում ցույց տվեց, որ AG Ծանր ընտրություններով բուժվող վերքերը միջին վերքի չափսեր են ունեցել 2.5 մմ 2-ով, մինչդեռ ոչ-հակալու հսկիչ սոուսը չունի 3,1 մմ 2 ճշմարիտ: հասել վիճակագրական նշանակության (Նկար 3M): p = 0.423): Ag1 + կամ AG1 + + + EDTA / BC- ի հետ բուժվող վերքերը ցույց չեն տվել վերքերի տարածքում (համապատասխանաբար 3.1 մմ 2 եւ 3,6 մմ 2): Բուժում թթվածնային AG աղի սոուսով նպաստեց վերագտնավորումը ավելի մեծ չափով, քան ոչ հակաակտիվ կառավարման հսկիչ սոուսը (համապատասխանաբար 34% եւ 15%) եւ AG1 + կամ AG1 + + EDTA / BC (10% եւ 11%) ( Գծապատկեր 3N): Մի շարք համապատասխանաբար):
Վերքի տարածքի եւ էպիթելի վերականգնման նման միտումները դիտվել են S. Aureus Biofilms- ի վարակված վերքերի (Նկար 3O) վարակված վերքերում: Թթվածնային արծաթե աղեր պարունակող սալիկապատված վերքերի տարածքը (2.0 մմ 2) 23% -ով `համեմատած ոչ-հակամանրէային սոուսով (2.6 մմ 2), չնայած որ այդ նվազումը նշանակալի չէր (էջ = 0,304): Բացի այդ, AG1 + բուժման խմբում վերքերի տարածքը փոքր-ինչ կրճատվել է (2.4 մմ 2), իսկ AG1 + + EDTA / BC- ի հետ բուժվող վերքը չի նվազեցրել վերքի տարածքը (2.9 մմ 2): AG- ի թթվածնի աղերը նաեւ նպաստեցին S. Aureus Biofilm- ի (31%) հետ վարակված վերքերի վերաթողացման վերաթողացմանը, քան այն, ինչ բուժվում են ոչ հակամանրէային կառավարման հետ (12%, էջ 3 հատ): AG1 + հագնվելու (16%, P = 0.903) եւ AG + 1 + EDTA / BC Հագուստը (14%, P = 0.965) ցույց տվեց էպիթելի վերականգնման մակարդակներ, որոնք նման են վերահսկմանը:
Բիոֆիլմի մատրիցի վրա արծաթե սալիկների ազդեցությունը պատկերացնելու համար կատարվել է Toto 1 եւ SYTIDE 60 Iodide ներկառուցված (Նկար 4): Toto 1 Iodide- ը բջջային անթույլատրելի ներկ է, որը կարող է օգտագործվել արտաբջջային միջուկային թթուները ճշգրիտ պատկերացնելու համար, որոնք առատ են Biofilms- ի ՊԸ-ում: Syto 60- ը բջջային թափանցելի ներկ է, որն օգտագործվում է որպես counterstain16: «Տոտո 1» եւ «SYTO» 60 Iodide- ի դիտարկումները, որոնք ներհոսք են հանդիսանում Pseudomonas Aeruginosa (Նկար 4A-D) եւ staphylococcus aureus- ի (Նկար 4I-L) ցույց տվեցին, որ 3 օր հագնվելու բուժումից հետո է ՊԸ-ն զգալիորեն կրճատվել է: պարունակում է թթվածնային բաներ AG եւ AG1 + + EDTA / BC: AG1 + Զգեստներ առանց հակաբիոֆիլմի լրացուցիչ բաղադրիչների, զգալիորեն նվազեցրել են բջջային հեռախոսը ԴՆԹ-ն, կեղծիքներով աերուգինոզով ներարկված վերքերի մեջ, բայց ստաֆիլոկոկախոտով ներհոսքի վերքերի մեջ ավելի քիչ արդյունավետ էին:
Վավեր Biofilm- ի VIVO պատկերապատում 3 օր բուժումից հետո `հսկիչ կամ արծաթե սալիկներով: Պորոշոտ պատկերներ Aeruginosa (A-D) եւ staphylococcus aureus (i-l) վիտրաժներ Toto 1 (Green) հետ `արտաբջջային միջուկներ պատկերացնելու համար, արտամղջային բիոֆիլմի պոլիմերների բաղադրիչ: Ներարկային նուկլեաթթուներ բխելու համար օգտագործեք SYTO 60 (կարմիր): թթուներ: P. Pseudomonas Aeruginosa (E-H) եւ staphylococ aureus (M-P) Biofilms- ով վարակված վերքերի էլեկտրոնային մանրադիտակների սկանավորումը 3 օր բուժումից հետո 3 օր բուժումից հետո: SEM մասշտաբի բար = 5 մկմ: Confocal Imaging Scaling Bar = 50 մկմ:
Էլեկտրոնային մանրադիտակների սկանավորումը ցույց տվեց, որ մկները ներհոսք են անում կեղծիքներ ունեցող բարենպաստ գորգերով (Նկար 4E-H) եւ staphylococcus Aureus- ի (Նկար 4M-P) իրենց վերքերի մեջ զգալիորեն ավելի քիչ մանրէներ ունեին բոլոր արծաթե հագուստներով:
Բիոֆիլմի վարակված մկների վերքի բորբոքումի ազդեցությունը գնահատելու համար կենսաֆաբրիկով վարակված վերքերի հատվածները, 3 օր վերահսկող կամ արծաթե հանդերձանքով բուժվող վերքերի հատվածներ: Ներքին նեյտրոֆիլների եւ մակրոֆագների քանակական որոշում: հատիկավոր հյուսվածքներ: Նկար 5): Բոլոր արծաթե հագուստները նվազեցրել են կեղծիքների եւ մակրոֆագների քանակը կեղծիքային աերուգինոզով վարակված վերքերի համեմատ, համեմատած ոչ հակամանրէային հսկիչ հագուստի հետ երեք օրվա բուժումից հետո: Այնուամենայնիվ, թթվածնային արծաթե աղի սոուսով բուժումը հանգեցրեց նեյտրոֆիլների ավելի մեծ նվազման (p = <0.0001) եւ մակրոֆագներ (P = <0.0001) `համեմատած այլ արծաթե սալիկների հետ (Նկար 5i, J): Չնայած AG1 + + EDTA / BC- ն ավելի մեծ ազդեցություն ունեցավ վերքի բիոֆիլմի վրա, այն իջեցրեց նեյտրոֆիլը եւ մակրոֆաժի մակարդակը ավելի փոքր չափով, քան AG1 + հագնվելու համար: S. Aureus Biofilm- ի հետ վարակված չափավոր վերքերը դիտվել են նաեւ AG- ի հետ հագնվելուց հետո (P = <0.0001), AG1 + (P = 0.0008) եւ AG1 ++ EDTA / BC (P = 0.0043) Oxisols համեմատ: Նմանատիպ միտումները նկատվում են նեյտրոպենիայի համար: վիրակապ (նկ. 5k): Այնուամենայնիվ, միայն թթվածնային AG աղի սոուսը ցույց է տվել հատիկավոր հյուսվածքի մակրոֆագների քանակի զգալի կրճատում, համեմատած S. Aureus Biofilms- ի վարակված վերքերի հետ (էջ 5 լ):
Նեյտրոֆիլներն ու մակրոֆեսը քանակականացվել են պսուդոմոնասի աերուգինա եւ ստաֆիլոկոկախոտային բիոֆիլմներով վարակված վերքերում, 3 օրվա ընթացքում բուժումից հետո, ոչ հակամանրէային հսկողությամբ կամ արծաթե սալիկներով: Նեյտրոֆիլները (գովազդը) եւ մակրոֆագները (EH) քանակականացվել են հյուսվածքների բաժիններում, որոնք ներկված են նեյտրոֆիլների կամ մակրոֆագների համար հատուկ հակամարմիններով: Նեյտրոֆիլների (i եւ k) եւ մակրոֆագների (J եւ L) քանակությամբ վերքերում վարակված վերքերի հետ, որոնք վարակված են Pseudomonas Aeruginosa (I եւ J) եւ staphylococcus aureus (k & l) Biofilms: N = 12 յուրաքանչյուր խմբում: Գրաֆիկները ցույց են տալիս միջին +/- ստանդարտ սխալ, նշանակության արժեքներ ոչ հակաբակտերիալ կառավարման սոուսով, * նշանակում է p = <0.05; *** նշանակում է p = <0.001; Ույց է տալիս p = <0.0001):
Այնուհետեւ մենք գնահատեցինք արծաթե սալիկների ազդեցությունը վարակով անկախ բուժմանը: Ոչ վարակված ժամանակաչափ վերքերը բուժվում էին ոչ հակամանրէային կառավարման սոուսով կամ արծաթե հագնվելու 3 օր (Նկար 6): Փորձարկված արծաթե սալիկների շարքում միայն թթվածնային աղի սոուսով բուժվող վերքերը փոքր էին մակրոոսկոպիկ պատկերներով, քան հսկիչով բուժվող վերքերը (Նկար 6A-D): Հիստոլոգիական վերլուծության միջոցով վերքերի տարածքի քանակականացումը ցույց տվեց, որ AG Oxysols- ի հագնվելու բուժումից հետո վերքի միջին տարածքը կազմել է 2.35 մմ 2, 2,96 մմ 2-ի համեմատ, վերահսկող խմբի հետ բուժվող վերքերի համար (էջ = 0.488) (թուզ) . 6i): Ի հակադրություն, վերքերի տարածքի ոչ մի կրճատում չի նկատվել AG1 + (3.38 MM2, P = 0.757) կամ AG1 + + EDTA / BC (4.18 MM2, P = 0.054) Հագուստը վերահսկող խմբի համեմատ: Epithelial- ի վերածննդի վերականգնման բարձրացումը դիտվել է AG Oxysol- ի զգեստի հետ `համեմատած վերահսկիչ խմբի հետ (համապատասխանաբար 30% ընդդեմ 22%), չնայած որ դա նշանակություն չունի (P = 0.067), սա բավականին նշանակալի է եւ հաստատում է նախորդ արդյունքները: Oxysols- ի հանդերձանքը խթանում է վերա էպիթելիացումը: - չկարգավորված վերքերի ectelitization17: Ի հակադրություն, AG1 + կամ AG1 + + EDTA / BC- ի հանդերձանքների բուժումը որեւէ ազդեցություն չուներ կամ չի ցուցաբերում վերստուգման հետ համեմատած վերափոխման հետ:
Արծաթե վերքի մաշման ազդեցությունը վերքերի բուժման վրա `չկարգավորված մկների մեջ` ամբողջական վերափոխմամբ: (AD) Վերքերի ներկայացուցիչներ, երեք օր բուժումից հետո երեք օրվա բուժումից հետո `ոչ հակամանրէային կառավարման հագնվելու եւ արծաթե սոուսով: (Eh) Հեմատոքսիլինի եւ Էոսինի հետ ներկառուցված վերքերի հատվածներ: Վերքի տարածքի (I) եւ տոկոսների տոկոսների քանակը (ժ) հաշվարկվել են վերքի միջնակարգ հատվածներից `պատկերի վերլուծության ծրագրակազմ օգտագործելով (N = 11-12 բուժման խումբ): Գրաֆիկները ցույց են տալիս միջին +/- ստանդարտ սխալ: * նշանակում է p = <0.05:
Արծաթը օգտագործման երկար պատմություն ունի որպես վերքերի բուժման հակամանրէային թերապիա, բայց շատ տարբեր ձեւակերպումներ եւ առաքման մեթոդներ կարող են հանգեցնել հակամանրէային արդյունավետության 18-ի տարբերությունների: Ավելին, արծաթե առաքման հատուկ համակարգերի հակամրոֆիլմի հատկությունները լիովին չեն հասկացվում: Չնայած հյուրընկալող իմունային պատասխանը համեմատաբար արդյունավետ է պլանկտոնիկ մանրէների դեմ, այն, ընդհանուր առմամբ, պակաս արդյունավետ է Biofilms19- ի դեմ: Պլանկտոնիկ բակտերիաները հեշտությամբ ֆորֆոկսֆիզի միջոցով են, բայց բիոկիպմենի շրջանակներում համախմբված բջիջները լրացուցիչ խնդիրներ են առաջացնում, սահմանափակելով այն տողերի պատասխանը, որ իմունային պատասխանը թողարկվի 20-ի կողմից: Նկատվել է, որ որոշ լեյկոցիտներ կարող են ներթափանցել BiofilMS21, բայց ի վիճակի չեն ֆագոցիտոզային մանրէներ, երբ այս պաշտպանությունը զիջում է 22: Հոլիստական ​​մոտեցումը պետք է օգտագործվի հյուրընկալող իմունային պատասխանը վերքերի բիոֆիլմի վարակի դեմ: Վերքի նոսրացումը կարող է ֆիզիկապես խանգարել բիոֆիլմը եւ հեռացնել բիոբուրդենի մեծ մասը, բայց հյուրընկալող իմունային պատասխանը կարող է անարդյունավետ լինել մնացած բիոֆիլմի դեմ, մանավանդ, եթե հյուրընկալող իմունային պատասխանը վարկաբեկված է: Այսպիսով, հակամանրէային թերապիաները, ինչպիսիք են արծաթե հանդերձանքը, կարող են աջակցել հյուրընկալող իմունային պատասխանին եւ վերացնել biofilm վարակները: Կազմը, համակենտրոնացումը, լուծումը եւ առաքման ենթաշերտը կարող են ազդել արծաթի հակամանրէային արդյունավետության վրա: Վերջին տարիներին արծաթե վերամշակման տեխնոլոգիայի առաջընթացներն այս հանդերձանքներն ավելի արդյունավետ են դարձրել 9,23: Քանի որ արծաթե հագուստի տեխնոլոգիան առաջընթաց է ունենում, կարեւոր է հասկանալ այս հագուստի արդյունավետությունը վերքի վարակի վերահսկման եւ, ավելի կարեւոր, վերքերի միջավայրում եւ բուժում:
Այս ուսումնասիրության մեջ մենք համեմատեցինք երկու առաջադեմ արծաթե սալիկների արդյունավետությունը սովորական արծաթե սալիկներով, որոնք արտադրում են AG1 + ION- ը Biofilms- ի դեմ, օգտագործելով տարբեր in vitro եւ vivo մոդելներում: Մենք նաեւ գնահատեցինք այս հագուստի ազդեցությունը վերքի միջավայրի եւ վարակիչ-անկախ ապաքինման վրա: Առաքման մատրիցայի ազդեցությունը նվազագույնի հասցնելու համար փորձարկված բոլոր արծաթե սալիկները կազմված էին կարբոքսիմեթիլկելլուլոզից:
Այս արծաթե հագուստի մեր նախնական գնահատականը, որպէսլոմոնոսա աէրոջլոկոկ »եւ staphylococcus aureus- ի դեմ, ի տարբերություն ավանդական AG1 + Dressings, ի տարբերություն ավանդական AG1 + Dressings, Ag1 + + EDTA / BC- ն եւ թթվածնային AG աղերը, արդյունավետորեն սպանելով Biofilm- ի մանրէները մի քանի օր: Բացի այդ, այս սալիկները կանխում են բիոֆիլմի վերափոխումը պլանկտոնիկ մանրէների կրկնակի ազդեցության վրա: AG1 + հագնվելու պարունակությունը պարունակում էր արծաթե քլորիդ, նույն արծաթե միացություն եւ բազային մատրիցա, նույն ժամանակահատվածում Biofilm- ի մեջ բակտերիալ կենսունակության վրա: Դիտարկումը, որ AG1 + + EDTA / BC սոուսը ավելի արդյունավետ էր Biofilm- ի դեմ, քան նույն մատրիցից բաղկացած AG1 + հագնվելու դեմ, եւ արծաթե միացությունն աջակցում է այն հասկացությանը, որ հաղորդվել է արծաթե քլորիդի դեմ այլուր 15: Այս արդյունքները պաշտպանում են այն միտքը, որ մ.թ.ա. եւ Էդտան լրացուցիչ դեր են խաղում ընդհանուր դերը, եւ որ այս բաղադրիչի բացակայությունը AG1 + Dressings- ում կարող է նպաստել Vitro- ի արդյունավետության չկատարմանը: Մենք գտել ենք, որ Ag2 + եւ Ag3 + IOP- ի արտադրող թթվածնային աղի աղցանները ավելի ուժեղ հակաբակտերիալ արդյունավետություն են ցուցաբերել, քան AG1 + եւ Ag1 + Edta / BC- ի նման մակարդակներում: Այնուամենայնիվ, վերափոխման բարձր ներուժի պատճառով անհայտ է, թե որքան երկար է մնում AG3 + իոնները ակտիվ եւ արդյունավետ վերքերի բիոֆիլմների դեմ եւ, հետեւաբար, արժանի են հետագա ուսումնասիրության: Բացի այդ, կան բազմաթիվ տարբեր սույններ, որոնք առաջացնում են AG1 + իոններ, որոնք այս ուսումնասիրության մեջ չեն փորձարկվել: Այս հագուստները բաղկացած են տարբեր արծաթե միացություններից, կոնցենտրացիաներից եւ բազային մատրիցներից, որոնք կարող են ազդել AG1 + իոնների առաքման եւ դրանց արդյունավետության դեմ բիոֆիլմների դեմ: Հատկանշական է նաեւ, որ Vitro- ն եւ VIVO մոդելներում կան շատ տարբեր տարբերություններ, որոնք օգտագործվում էին կենսաֆիլմների վերքերի հանդերձանքների արդյունավետությունը: Օգտագործված մոդելի տեսակը, ինչպես նաեւ այս մոդելներում օգտագործված լրատվամիջոցների աղի եւ սպիտակուցի պարունակությունը կազդի հագնվելու արդյունավետության վրա: Մեր VIVO մոդելում մենք թույլ տվեցինք, որ բիոֆիլմը հասունանա vitro- ին, ապա այն փոխանցեց վերքի մաշկային մակերեսին: Հյուրընկալող մկնիկի իմունային պատասխանը համեմատաբար արդյունավետ է վերքի վրա կիրառվող պլանկտոնային մանրէների դեմ, դրանով իսկ վերքը բուժելով բիոֆիլ: Հասուն բիոֆիլմի վերքին հասունի ավելացումը սահմանափակում է հյուրընկալողի իմունային պատասխանի արդյունավետությունը `Biofilm- ի ձեւավորմանը, թույլ տալով, որ հասուն բիոֆիլմը ինքն իրեն հաստատվի վերքի մեջ: Այսպիսով, մեր մոդելը մեզ թույլ է տալիս գնահատել հասուն բիոֆիլմների վրա հակամանրէային սալիկների արդյունավետությունը, նախքան վերքերը սկսելը:
Մենք նաեւ պարզեցինք, որ հագնվելու տեղավորումը ազդել է Silver-Grown Biofilms- ում եւ մորթուց մաշկի վրա արծաթե սալիկների արդյունավետության վրա: Վերքի հետ սերտ շփումը համարվում է քննադատական ​​հագնվելու Հակամիչ արդյունավետության համար ,24,25: Թթվածնային AG աղեր պարունակող սալիկները սերտ կապի մեջ էին հասուն բիոֆիլմների հետ, ինչը հանգեցնում է կենսունակ մանրէների քանակի կրճատմանը, բիոֆիլմում `24 ժամ հետո: Ի հակադրություն, երբ վերաբերվում են AG1 + եւ Ag1 + + EDTA / BC- ի հետ, մնում են կենսունակ մանրէների զգալի թվեր: Այս հագուստները պարունակում են մաշկի ամբողջ երկարության երկայնքով կարեր, որոնք ստեղծում են մեռած տարածքներ, որոնք կանխում են սերտ շփումը Biofilm- ի հետ: Մեր in vitro ուսումնասիրություններում այս ոչ կոնտակտային տարածքները կանխեցին կենսունակ բակտերիաների սպանությունը Biofilm- ի շրջանակներում: Մենք բակտերիալ կենսունակությունը գնահատեցինք միայն 24 ժամ բուժումից հետո. Ժամանակի ընթացքում, քանի որ հագնվում է ավելի հագեցած, կարող է լինել ավելի քիչ մեռած տարածք, իջեցնելով տարածքը այս կենսունակ մանրէների համար: Այնուամենայնիվ, սա կարեւորում է հագնվելու կազմի կարեւորությունը, ոչ միայն արծաթի տեսակը հագնվելու մեջ:
Vitro- ի ուսումնասիրության ընթացքում օգտակար են արծաթե տարբեր տեխնոլոգիաների արդյունավետությունը համեմատելու համար, կարեւոր է նաեւ հասկանալ VIVO- ում կենսաֆիլմների այս հագուստի հետեւանքները, որտեղ հյուրընկալող հյուսվածքները եւ իմունային պատասխանները նպաստում են բիոֆիլմների դեմ ուղղված հյուսվածքների արդյունավետությանը: Վերքի բիոֆիլմներում այս հանդերձների ազդեցությունը նկատվել է, օգտագործելով սկան էլեկտրոնային մանրադիտակ եւ EPS բիոֆիլիա, օգտագործելով ներգանգային եւ արտաբջջային ԴՆԹ ներկեր: Մենք գտել ենք, որ 3 օր բուժումից հետո բոլոր զգեստներն արդյունավետ էին բիոֆիլմի վարակված վերքերում բջջային հեռախոսազանգը նվազեցնելու համար, բայց AG1 + հագնվելու էր ստաֆիլոկոկախոտային վարակված վերքերում: Էլեկտրոնային մանրադիտակների սկանավորումը նաեւ ցույց տվեց, որ զգալիորեն պակաս մանրէներ ներկա էին արծաթե սալիկներով բուժվող վերքերին, չնայած դա ավելի ցայտուն էր թթվածնային AG աղի սոուսով եւ AG1 + + EDTA / BC հագնվելու հետ: Այս տվյալները ցույց են տալիս, որ արծաթե զարդարանքները տարբեր աստիճանի ազդեցություն են ունեցել բիոֆիլմի կառուցվածքի վրա, բայց արծաթե հագուստներից ոչ մեկը չկարողացավ վերացնել Biofilm- ի վարակների բուժման անհրաժեշտությունը. արծաթե բազկաթոռների օգտագործումը: Բուժումին նախորդում է ֆիզիկական դիբրացորդը `բիոֆիլմի մեծ մասը հեռացնելու համար:
Քրոնիկ վերքերը հաճախ ծանր բորբոքման վիճակում են, ավելի երկար ժամանակահատվածում վերքերի հյուսվածքի մեջ մնացած քանակությամբ բորբոքային բջիջները, որոնք առաջացնում են հյուսվածքների վնաս պատճառելը եւ վերքի մեջ արդյունավետ բջջային նյութափոխանակության համար անհրաժեշտ թթվածին: Biofilms- ը սրում է այս թշնամական վերքերի միջավայրը `բացասաբար ազդելով բուժման տարբեր եղանակներով, ներառյալ բջիջների տարածման եւ միգրացիայի բարելավման եւ Prosflammative Cytokines27- ի բարելավման արգելքը: Քանի որ արծաթե հագուստները դառնում են ավելի արդյունավետ, կարեւոր է հասկանալ վերքերի միջավայրում եւ բուժող ազդեցությունը:
Հետաքրքիր է, որ չնայած բոլոր արծաթե սալիկները ազդել են բիոֆիլմի կազմի վրա, միայն թթվածնային արծաթե աղի սալիկներն աճել են այս վարակված վերքերի վերելակ: Այս տվյալներն աջակցում են մեր նախորդ գտածոներին 17 եւ Kalan et Al. (2017) 28, որը ցույց տվեց թթվածնային արծաթե աղիքի լավ անվտանգություն եւ թունավորություն, քանի որ արծաթի ստորին կոնցենտրացիաները արդյունավետ էին բիոֆիլմների դեմ:
Մեր ընթացիկ ուսումնասիրությունը կարեւորում է արծաթե տեխնոլոգիայի տարբերությունները հակամանրէային արծաթե հագուստի եւ վերքերի միջավայրի եւ վարակ-անկախ բուժման այս տեխնոլոգիայի ազդեցության միջեւ: Այնուամենայնիվ, այս արդյունքները տարբերվում են նախորդ ուսումնասիրություններից, որոնք ցույց են տալիս, որ AG1 + + EDTA / BC Հյուսեք բուժիչ պարամետրերը VIVO- ում վիրավորված նապաստակի ականջների բարելավված: Այնուամենայնիվ, դա կարող է պայմանավորված լինել կենդանիների մոդելների, չափման ժամանակների եւ բակտերիալ հայտի մեթոդների միջեւ տարբերությունների շնորհիվ: Այս դեպքում վերքի չափումները վերցվել են վնասվածքից 12 օր անց, թույլ տալու համար հագնվելու ակտիվ բաղադրիչները բիոֆիլում ավելի երկար ժամանակահատվածի վրա գործելու համար: Դա աջակցում է մի ուսումնասիրությամբ, որը ցույց է տվել, որ կլինիկորեն վարակված ոտքերի խոցերը, որոնք բուժվում են AG1 + + EDTA / BC- ի հետ, ի սկզբանե աճել են չափսերից մեկ շաբաթվա ընթացքում բուժման մեկ շաբաթվա ընթացքում, իսկ հետո `4 շաբաթվա ընթացքում բուժման հաջորդ 3 շաբաթվա ընթացքում ոչ հակամանրէային օգտագործումը: Թմրամիջոցներ: CMC- ի սալիկները `խոցերի չափը նվազեցնելու համար:
Նախկինում արծաթի որոշակի ձեւերն ու կոնցենտրացիաները ցուցադրվել են ցիտոտոքսիկ in vitro 11, բայց այս in vitro- ի արդյունքները միշտ չէ, որ վերածվում են վիվոյի անբարենպաստ հետեւանքների: Բացի այդ, արծաթե տեխնոլոգիաների առաջընթացը եւ արծաթե միացությունների եւ զարդարանքների կոնցենտրացիաների ավելի լավ պատկերացումները հանգեցրել են բազմաթիվ անվտանգ եւ արդյունավետ արծաթե սալիկների զարգացմանը: Այնուամենայնիվ, քանի որ արծաթե հագուստի տեխնոլոգիան առաջադիմում է, կարեւոր է հասկանալ վերքի վրա այս հագուստի ազդեցությունը 31,32,33: Նախկինում հաղորդվում էր, որ վերա էպիթելիացման բարձր մակարդակը համապատասխանում է հակաբորբոքային M2 մակրոֆագների մեծ մասնաբաժինին `համեմատած M1- ի Probormation M1 ֆենոտիպի հետ: Այս մասին նշվել է մկնիկի նախորդ մոդելում, որտեղ արծաթե հիդրոգելի վերքի զարդեր համեմատվել են արծաթե սուլֆադիաինի եւ ոչ հակամանրէային հիդրոգելի հետ:
Քրոնիկ վերքերը կարող են ցուցադրել ավելորդ բորբոքում եւ նկատվել է, որ ավելորդ նեյտրոֆիլների առկայությունը կարող է վնասակար լինել վերքերի վերականգնման համար 35: Նեյտրոֆիլացվող մկների ուսումնասիրության մեջ, նեյտրոֆիլների առկայությունը հետաձգեց վերամիավորումը: Չեյնոֆիլների ավելցուկի առկայությունը հանգեցնում է պաշտպանության բարձր մակարդակի եւ ռեակտիվ թթվածնի տեսակների, ինչպիսիք են սուպերօքսիդը եւ ջրածնի պերօքսիդը, որոնք կապված են քրոնիկ եւ դանդաղ բուժող վերքերի 37,38-ի հետ: Նմանապես, մակրոֆիգայի համարների աճը, եթե անվերահսկելի է, կարող է հանգեցնել հետաձգված վերքերի բուժման 39-ի: Այս աճը հատկապես կարեւոր է, եթե մակրոֆագները ի վիճակի չեն անցում կատարելագործված ֆենոտիպից դեպի բուժիչ ֆենոտիպ, ինչը հանգեցնում է բուժման բորբոքային փուլից չկատարվող վերքերի: Մենք նկատեցինք նեյտրոֆիլների եւ մակրոֆագների անկում բիոֆիլմի վարակված վերքերի մեջ 3 օր բուժումից հետո, բոլոր արծաթե սալիկներով, բայց անկումը ավելի ցայտուն էր թթվածնային աղի սալիկներով: Այս անկումը կարող է լինել արծաթի իմունային պատասխանների անմիջական արդյունք, պատասխանը նվազեցնելու համար, կամ վերքը վերքի հետագա փուլում է գտնվում վերքի հետագա փուլում եւ, հետեւաբար, կրճատվել է: Վերքի բորբոքային բջիջների քանակը նվազեցնելը կարող է պահպանել շրջակա միջավայրը, որը նպաստում է վերքերի բուժմանը: Անհայտ է, թե ինչպես է AG Oxysalts- ի խթանման գործողությունների մեխանիզմը, բայց բուսականության թթվածին թթվածին արտադրելու եւ ջրածնի պերօքսիդի վնասակար մակարդակները ոչնչացնելու ունակությունը կարող է բացատրել այս եւ հետագա ուսումնասիրություն:
Քրոնիկ ոչ բուժիչ վարակված վերքերը խնդիր են առաջացնում ինչպես բժիշկների, այնպես էլ հիվանդների համար: Չնայած շատ հագուստներ պնդում են հակամանրէային արդյունավետություն, հետազոտությունը հազվադեպ է կենտրոնանում վերքերի միկրո միջավայրի վրա ազդող այլ հիմնական գործոնների վրա: Այս ուսումնասիրությունը ցույց է տալիս, որ արծաթե տարբեր տեխնոլոգիաներ ունեն տարբեր հակամանրէային արդյունավետություն եւ, կարեւորագույն, տարբեր հետեւանքների վերքերի միջավայրի եւ բուժման վրա, անկախ վարակներից: Չնայած այս in vitro- ն եւ VIVO ուսումնասիրություններում ցույց են տալիս այս հագուստի արդյունավետությունը վերքի վարակների բուժման եւ բուժման խթանման, պատահականորեն վերահսկվող փորձությունների խթանումն անհրաժեշտ է:
Ընթացիկ ուսումնասիրության ընթացքում օգտագործված եւ (կամ կամ վերլուծված տվյալների շտեմարանները մատչելի են համապատասխան հեղինակից `ողջամիտ խնդրանքով: